Terapia Epigenómica en Helmintos

 Terapia Epigenómica en Asma por alergia a la quitina de los Helmintos

Tema: La sirtuina-1 defectuosa aumenta la expresión de IL-4 a través de la acetilación de GATA-3 en pacientes con asma grave

Mecanismo Epigenómico: Acetilación de GATA-3

Cómo se lo hizo: Se lo hizo con una técnica ex vivo con sirtinol este hace una acetilación de GATA-3 con ello se identifica el mecanismo de aumento en la expresión de citocinas TH2 ya que provoca una  inhibición de la sirtuina. La inhibición de la sirtuina por 30 μmol / L de sirtinol resultó en un aumento de la acetilación de GATA-3 en la proteína nuclear de los linfocitos T HUT78.

Resultados:

Corto Plazo: Se observa una reducción de los niveles de SIRT1 en pacientes con asma grave contribuye a una mayor expresión de IL-4 y que este sería un objetivo novedoso para el tratamiento del asma provocada por helmintos.

Mediano Plazo: Demostrar un verdadero aumento en el nivel de IL-4 sanguíneos para prevención de un episodio de asma.

Largo Plazo: Tratar de crear una terapia epigenética preventiva para que no se de asma grave en personas parasitadas con ascariasis ya que su envoltura quitinosa conlleva a reacciones alérgicas.

Referencia Bibliográfica:

- https://www.jacionline.org/article/S0091-6749(15)01515-8/fulltext

- https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1931312816301561

Edición de Ácidos Nucleicos

Técnica de edición genómica en nemátodos

Tema: Mutagénesis CRISPR / Cas9 y expresión de transgenes mutantes dominantes como enfoques genómicos funcionales en nematodos parásitos

Tipo de Edición: CRISPR / Cas9 in vitro embrionaria

Dirigido hacia: ARNg  dirigido a ADN Genes daf-16, daf-12

Dirigido por: CRISPR / Cas9

Organo a tratar: Intestino-Células intestinales (enterocitos)

Vía de administración: Microinyección gonadal 

Resultados 

A corto plazo: Permite la eliminación funcional de genes o la introducción de mutaciones con ello tratar de lograr gusanos incapaces de infectar.

Mediano plazo:  Comprender el mecanismo de resistencia a los antiparasitarios para establecer las estrategias de control.

Largo plazo: Encontrar un tratamiento efectivo contra las enfermedades provocadas por helmintos.

Referencia Bibliográfica:

-https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fgene.2019.00656/full

-https://www.youtube.com/watch?v=FYRqK2rBWs4

Stem Cells

Terapia con Stem Cells en Ascariasis

Tipo de Stem Cells: Stem Cells somáticas - Células progenitoras hematopoyéticas (TCPH) de la médula ósea, la sangre periférica, el cordón umbilical o el hígado fetal.

Método de obtención: De medula ósea por aspiración mediante varias punciones, del  cordón umbilical se obtienen de la sangre del cordón umbilical en el momento del parto se seleccionan las células madre hematopoyéticas que son crioconservadas y de sangre periférica se utiliza un fármaco se administra vía subcutánea, una vez se comprueba que hay suficiente cantidad de células madre hematopoyéticas circulando por la sangre, se realiza aféresis, para extraer la sangre.

Vía de administración: Las células madre de reemplazo se administran a través de las venas, justo como si se tratara de una transfusión sanguínea.

Resultados: 

Corto Plazo: Demostrar un cambio en el sistema hematopoyético hacia las enfermedades parasitarias.

Mediano Plazo: Reconstruir el sistema hematopoyético que se vio afectado por la invasión parasitaria y disminuir el problema de la neumonía.

Largo Plazo: Utilizar la Terapia de Stem Cells para combatir las enfermedades parasitarias realzando el sistema hematopoyético e inmunológico aumentando las defensas en el organismo.

Referencia Bibliográfica:

- https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/tid.13224

Transgénicos

 Ejemplo de Transgénico

Tema: Perfil transcripcional de subconjuntos de eosinófilos en ratones transgénicos con interleucina-5

Tipo de transgénico animal: Ratones IL5T Knock-in

Métodos de Obtención: Microinyección Pronuclear

Usos: Identificar conjuntos de genes que están asociados con la progresión del linaje de eosinófilos, para creación de vacunas.

Explicación:

El gen híbrido de 12 kb fue escindido como un Fragmento BamHI e inyectado en ovocitos CBA / Ca, luego se transfiere a los oviductos de pseudopreñadas. Los ratones que expresan de forma constitutiva IL-5 tienen más de 10 veces más eosinófilos en los órganos hematopoyéticos que sus homólogos.

Indicar 5 ventajas y 5 desventajas de los transgénicos

Ventajas:

-Los alimentos transgénicos se podrían diseñar de tal forma que aumentasen sus nutrientes.

-Aumentar la producción y contar con alimentos más resistentes.

-Permiten experimentar en animales para comprender enfermedades.

-Elaboración de tratamientos como fármacos o vacunas a través de del uso de proteínas recombinantes.

-Obtención de cultivos resistentes a la sequía y frío.

Desventajas:

-El uso de alimentos es la verdadera y completa ignorancia que se tiene sobre sus efectos a largo plazo.

-Existe una relación entre el consumo de alimentos transgénicos y el desarrollo de alergias, intolerancias y enfermedades autoinmunes.

-Puede haber una alta tasa de mortalidad y otros efectos nocivos en los animales.

-Al modificar especies ya existentes podemos poner en riesgo especies autóctonas.

-Aumento de toxicidad en los alimentos.

Referencias Bibliográficas:

1.https://jlb.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/JLB.6MA1117-451R

2.https://www.ecologiaverde.com/ventajas-y-desventajas-de-los-alimentos-transgenicos-1073.html

ADN Recombinante

 ADN Recombinante en la naturaleza:

Un ejemplo de ADN recombinante en la naturaleza es la Recombinación genética. La recombinación genética es un proceso mediante el cual se obtiene un nuevo genotipo a través del intercambio de material genético entre secuencias homólogas de DNA, los cuales tienen orígenes diferentes. 

Mediante la recombinación genética la información genética de dos genotipos puede ser agrupada en un nuevo genotipo. Es así que la recombinación genética es una forma efectiva a través de la cual se mantiene e incluso aumenta la variabilidad genética de una población. (1)

 ADN Recombinante en Ascaridiasis:

Tema: La inmunidad protectora provocada por el nematodo-proteína recombinante As37 conservada contra Infección por Ascaris suum

Objetivo: La nogenicidad y la eficacia de la vacuna del As37 recombinante.

Gen: Gen que codifica para la proteína AS37

Enzimas de restricción: XhoI y AyrII

Enzima ligasa: Ligasa T4

Vector:  vector de expresión procariótico pET41a

Célula Receptora: Células E. coli BL21

Mecanismo de transferencia o inserción del gen:Transformación

Métodos de identificación de clones: Cultivo,Western Blot y Elisa

Referencias Bibliográficas:

1.https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Recombinacion-homologa

2.https://journals.plos.org/plosntds/article?id=10.1371/journal.pntd.0008057

Técnicas Moleculares de Secuenciación

Secuenciación de Ascaris Lumbricoides

Se desarrolló un método de extracción de ADN modificado basado en los métodos de Fenol / Cloroformo y Qiagen. Para las cinco muestras de la línea germinal basados ​​en cox-1, el ADN se extrajo del útero, el oviducto o el ovario de los gusanos. Se secuenciaron muestras de ADN de A. lumbricoides utilizando la secuenciación de extremos emparejados de lectura corta de Illumina HiSeq 2500. El ADN se cuantificó mediante UV Spec y Picogreen.

Referencia Bibliográfica:

-Molecular evidence of hybridization between pig and human Ascaris indicates an interbred species complex infecting humans [Internet]. eLife. 2020 [cited 31 January 2021]. Available from: https://elifesciences.org/articles/61562#abstract

-Velázquez L, Aragón Martínez M. [Internet]. Www2.inecc.gob.mx. 2021 [cited 31 January 2021]. Available from: http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/extraccion.pdf

Prueba PCR para Ascaris Lumbricoides

 

PCR en tiempo real Ascaridiasis

La PCR en tiempo real es una variante de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizada para amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el producto de la amplificación de ácido desoxirribonucleico (ADN), para una mejor detección basada en PCR en tiempo real de la infección por Ascaris se relizaron pruebas de huevos en heces humanas y del parásito, se amplificaron y secuenciaron ADN ribosómico nuclear (regiones ITS1 e ITS2) y ADN mitocondrial (gen cox1) presentando una especificidad cercana al 100% y una sensibilidad del 80%.

Referencia Bibliográfica:

-Sadaow, L., Sanpool, O., Phosuk, I., Rodpai, R., Thanchomnang, T., Wijit, A., … Intapan, P. M. (2018). Molecular identification of Ascaris lumbricoides and Ascaris suum recovered from humans and pigs in Thailand, Lao PDR, and Myanmar. Parasitology Research, 117(8), 2427–2436. doi:10.1007/s00436-018-5931-6 Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29860571/